Script IV RT MasterMix ( for qPCR)反轉錄
Script IV RT MasterMix采用第四代高達60℃的全新高溫逆轉錄酶，可以通讀GC含量豐富，二級結構復雜的RNA模板，極大提高了逆轉錄效率，CT值一般提早2-3個循環。Script IV RT MasterMix ( for qPCR)反轉錄
Script IV RT MasterMix
( Perfect for qPCR )
Script IV RT MasterMix ( for qPCR)反轉錄
目錄號:71618
產品內容
Components | 71618-50 50 rxns (20 μl/rxn) | 71618-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x RT Mix IV | 200μl | 400μl |
RNase free H2O | 1.5 ml | 1.5 ml |
保存條件
-20℃保存，有效期 12 個月。
產品簡介
Script IV RT MasterMix采用第四代高達60℃的全新高溫逆轉錄酶，可以通讀GC含量豐富，二級結構復雜的RNA模板，極大提高了逆轉錄效率，CT值一般提早2-3個循環。
5x RT Mix IV為一管式逆轉錄預混液，含有逆轉錄所需的所有試劑（Script IV Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture、RT Buffer），并且，針對qPCR進行特別優化oligodT和N6隨機引物配比，使cDNA合成可從RNA轉錄本的各個區域起始并具有相同的逆轉錄效率，zui大程度保證了qPCR結果的真實性和可重復性。
適用范圍
第一鏈cDNA合成，尤其高GC含量，復雜模板的cDNA合成?？捎糜诟呖截?、低拷貝基因的檢測。
注意事項
1． 避免RNase污染。
2． 為保證反轉錄成功，建議使用高質量的RNA樣品。
3． 5x RT Mix IV含有甘油比較粘稠，容易吸附在管壁和吸頭外，導致損失， 使用前請點甩離心后取用。 5x RT Mix IV包含的酶過量，即使每次分別按照3.8 μl使用，也不影響使用效果。
4． 20 μl逆轉錄反應體系建議加入不超過1μg的Total RNA。如果目的基因的表達量非常低，最多加入5 μg Total RNA，否則，RNA量過高，可能會超出后續qPCR的線性范圍。
5． 本產品適用于包含Ploy (A)結構的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)結構的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。
6． 如果模板具有復雜二級結構或高GC區域，推薦使用變性步驟，即在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5 min后迅速轉移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O，混勻，50°C孵育15 min進行逆轉錄。
第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應體系為例)
重要提示：操作前，請將各組分輕彈混勻，點甩離心后置冰上備用。
1． 反應體系的配制
于冰上，在PCR管中，加入以下組分：
Components | Volume |
Total RNA / mRNA | 50ng ~ 1μg / 5ng ~ 100ng |
5x RT Mix IV | 4 μl |
RNase-free H2O | To 20 μl |
2． 輕柔吸打混勻，50℃孵育15 min，進行逆轉錄反應。
3． 85°C加熱5 sec，終止反應。
逆轉錄產物可立即用于qPCR反應，或保存于-20°C，并在半年內使用；長期存放，請分裝后存于-70°C。
qPCR
建議取1~2μl cDNA產物原液作為20μl qPCR反應體系的模板。
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